Как се чете сертификат за анализ (COA): HPLC, масспектрометрия и чистота

Сертификатът за анализ (COA) е докладът на лабораторията за една конкретна партида от дадено съединение. При изследователските пептиди той отговаря на два отделни въпроса: това ли е правилната молекула и каква част от флакона е именно тя, а не нещо друго. Двата въпроса изискват два различни метода и полезният сертификат показва и двата.

Чистота: HPLC хроматограмата

Високоефективната течна хроматография (HPLC) пропуска разтворената проба през колона, която задържа различните молекули за различно време. Детектор в края записва сигнал при излизането на всяка от тях и резултатът е хроматограма: времето е по хоризонталата, силата на сигнала — по вертикалата. Целевият пептид трябва да се появи като един висок, остър пик. Примесите — по-къси вериги, останали от синтеза, окислени или скъсени форми — се виждат като по-малки пикове около него.

Чистотата е площта на главния пик като дял от площта на всички пикове. Резултат ≥99% означава, че от всичко, което детекторът е регистрирал, поне 99% е главният пик. Това е мярка колко чиста е партидата, а не колко пептид има във флакона — последното е отделна стойност (нетно съдържание на пептид), която някои сертификати също посочват.

Идентичност: масспектърът

HPLC сама по себе си не може да докаже коя молекула е главният пик — и грешно съединение може да даде един чист пик. Масспектрометрията (MS) решава въпроса за идентичността, като измерва масата на молекулата. Сертификатът трябва да посочва теоретичната и измерената молекулна маса и те трябва да съвпадат в тесни граници. При по-големите пептиди спектърът често показва няколко пика на една и съща молекула с различен заряд; софтуерът ги обединява в една измерена маса.

Какво съдържа надеждният сертификат

• Името на лабораторията, която е извършила анализа — в идеалния случай независима от продавача.
• Номер на партида, който съответства на продаваната партида, и дата на изпитването.
• Самата хроматограма, а не само процент, с видим главен пик и евентуалните примеси.
• Резултата от масспектрометрията: очаквана срещу измерена молекулна маса.
• Условията на метода (колона, дължина на вълната, градиент) — знак, че изпитването наистина е проведено както е описано.

Тревожни сигнали

• Процент чистота без хроматограма зад него.
• Един и същ сертификат за всички размери или всички партиди.
• Липсва име на лаборатория или лабораторията е самият продавач.
• Идеално равна базова линия с един-единствен пик и нищо друго — реалните хроматограми имат шум и малки пикове.

BioPeptide публикува пълните сертификати от независима лаборатория, с двете им страници, на страниците на продуктите и в раздел „Лабораторни резултати“, така че посочените на сайта стойности могат да бъдат проверени срещу документите зад тях. Сертификатите описват изследователски материал; нищо тук не е указание за употреба при хора или животни.

1. 1.ICH Q2(R2): Validation of Analytical Procedures. International Council for Harmonisation, 2023.
2. 2.United States Pharmacopeia, General Chapter <621> Chromatography.